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《中国药房》生半夏对生川乌中生物碱溶出量的影响

时间:2016-05-21 09:50来源:作者: 点击:

  【摘要】目的:测定生川乌与不同比例的生半夏配伍水浸液中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量。方法:将生川乌与生半夏分别按l:0、l:0.125、1:0.25、1:0.5、l:0.75、l:l、l:2的比例配伍,采用HPLC法测定各比例配伍样品中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量。色谱条件为:HypersilBDSC18(5m,4.6mmx250mm)色谱柱,流动相为甲醇:水:氯仿:三乙胺(70:30:2:0.1),流速为1.Oml/min,柱温30°C,检测波长235nm。结果:乌头碱在1.5g/II11.-25.0g/ml(t=0.9996)、新乌头碱在17.0“g/ml-85.0“g/rrd(t=0.9998)、次乌头碱在16.0g/m【60.0g/ml(0.9995)范围内线性关系良好。随着生半夏配伍比例的增加,生川乌中3种生物碱的溶出量逐渐降低。结论:生半夏可降低生川乌水浸液中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的溶出量。

  【关键词】高效液相色谱法;乌头碱;新乌头碱;次乌头碱;含量测定

  【中图分类号】R284.1【文献标识码IA【文章编号]1004--6879(2013)02--9104--03

  乌头和半夏是出自“十八反”的药对,但从古至今在许多处方中配伍使用,如孙思邈(《千金要方中的大五饮丸、半夏汤,(《金匮要略》中的赤丸方,宋代太平惠民和剂局方中的十四味建中汤等;以及近代外敷治疗膝骨性关节病的乌头半夏散,治疗乙肝的神丹等。乌头和半夏能否共用,一直是学者们争论的焦点。本研究通过探讨生川乌与不同比例生半夏配伍后水浸液中3种生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱,生物碱是乌头的主要毒性成分)的含量,探讨生川乌与生半夏毒性最小的配伍比例,以期为临床用药提供实验依据。

  1仪器与试药

  1.1主要仪器安捷伦l200高效液相色谱仪,美国安捷伦公司;HylzemilBDSCI8(5m,4.6mmx25omm)色谱柱,大连伊利特分析仪器有限公司。

  1.2试药乌头碱(批号:201l011)、次乌头碱(批号:201101RS)、新乌头碱(批号:201lOl1)对照品,云南特法特生物科技有限公司。生川乌(批号:0902l2),河北省光明饮生有限公司汉草饮生厂;生半夏(批号:l00l01),河北省安国市光明饮片加工厂。

  2方法与结果

  2.1色谱条件流动相为甲醇一水一氯仿一三乙胺(70:30:2:0.1),检测波长235nm,流速1.0ml/min,柱温30~C,进样量l0u。

  2.2对照品溶液的制备分别取对照品精密称定,an-氯甲烷溶解,配成lml含乌头碱50g、新乌头碱100g、次乌头碱160g的混合对照品溶液。精密量取混合对照品溶液稀释成lml含乌头碱分别为25g、l2.5ug、6.25ug、3.125ug、1.5625ug的等比稀释溶液。

  2.3供试品溶液的制备称取单味生川乌(生川乌:生半夏),3倍量水浸泡3次,每次24h,合并滤液,用等体积乙醚提取3次,乙醚萃取液合并后20°C下蒸干,加二氯甲烷溶解,即得供试品溶液。其余不同配伍比例组处理同单味生川乌。

  2.4方法学考察

  2.4.1线性范围考察:分别精密吸取系列混合对照品溶液l0l,按照2.1的色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标,进样浓度(g/m1)为横坐标,绘制标准曲线,得乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的回归方程分别为:/1-14.502X+0.2743、r=0.9996,Y=I1.2l6).7607、=I).9998,Y=l1.6245.495j'--M).9996。鸟碱在1.5g/ml-25.0g/ml、新乌头碱在17.0g/l85.0,ml、次乌头碉芷16.0g/l-160g/llVa范围内,线性关系良好。

  2.4.2精密度试验:精密吸取乌头碱浓度为50ug/md的混合对照品溶液l0l,连续进样5次,乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的峰面积ID值分别为1.02%、1.21%、1.08%(n=5),说明仪器精密度良好。

  2.4.3重复性试验:精密称取生川乌样品,按2.3的方法操作制备供试品溶液,重复测定5次,得新乌头碱、乌头碱和次乌头碱的平均含量分别为0.080mg/g、0.021mg/g、0.125mg/g,RSD值分别为1.21%、1.16%、1.13%,表明实验有很好的重复性。

  2.4.4稳定性试验:在相同实验条件下,各供试品溶液分别于室温下放置0、4、8、12、24h后测定,结果见表1,表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

  2.4.5加样回收率试验:精密吸取对照品溶液,其中含乌头碱l2.5ug、新乌头碱25g、次乌头碱40g,置于25ml三角烧瓶中,室温下挥去二氯甲烷,精密称取生川乌加入三角烧瓶,按照2.3的条件制备供试品溶液,按照2.1的色谱条件进行含量测定,计算回收率(n=5)。结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的平均加样回收率分别为98.79%、97.340/0、101.330值分别为1.1%、1.08%、1.21%。

  2.5供试品测定分别精密吸取生川乌、生半夏不同比例配伍组供试品溶液10l进行含量测定,结果见表2:随着半夏比例的增加,生川乌中3种生物碱的溶出量均下降,显示生川乌毒性降低。3讨论乌头类生物碱是生川乌中的主要毒性成分,同时也是其主要有效成分。乌头类生物碱的测定方法有酸碱中和法、分光光度法、薄层扫描法等,目前最常用的是薄层扫描法中的高效液相色谱法(HPLC)。2010中国药典中采用高效液相色谱法可以同时测定6种单酯型和双酯型生物碱的含量,操作简便,样品用量少,杂质分离效果好,乌头碱、次乌头碱、新乌头碱均达到了基线分离,回收率、重现性、精密度均很好。本研究研究发现,生川乌中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量随生半夏加入量的增加而降低,说明生川乌的毒性和药效也会随着半夏加入量的增加而降低,但与十八反中二药合用会引起剧烈的毒性反应或副作用的说法不符,有待进一步的研究探讨。

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